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Accessori per microscopia in fluorescenza
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I componenti del microscopio per fluorescenza descritti fino ad ora sono disponibili in forma
di moduli e possono essere facilmente integrati nel microscopio ottico Carl Zeiss. I componenti principali sono gli illuminatori HBO 50 o HBO 100 (1), l'illuminatore per luce riflessa (2) ed il cursore per fluorescenza (3). L'illuminatore per luce riflessa contiene una slitta di sbarramento e portafiltri (2a) ed il diaframma ad iride regolabile per l'impostazione del campo illuminato (2b).
La differenza principale tra l'illuminatore per epifluorescenza e l'illuminatore per luce riflessa consiste nel fatto che in fluorescenza non viene usato il disco di diffusione, perchè ridurrebbe senza necessità l'intensità di eccitazione. Nella microscopia in luce riflessa "vera e propria", il disco è invece importante, perchè viene usato per ottenere un'illuminazione omogenea. In fluorescenza viene invece usato il filtro attenuatore del rosso, per eliminare la parte di luce rossa ed infrarossa a volte molesta ancora prima che raggiunga il preparato.
Nel cursore per fluorescenza possono essere alloggiati fino a tre serie di filtri per le diverse marcature di fluorescenza. Ciò rende molto agevole il passaggio da una all'altra.
Per la marcatura dei preparati viene usata sempre più spesso la "fluorescenza multipla". Questo metodo fa risaltare le differenti strutture con diversi colori. Queste possono essere osservate singolarmente – ognuna per sè - passando da un'immagine all'altra con l'uso del cursore. Una soluzione più semplice è comunque l'impiego di speciali serie di filtri, che permettono l'osservazione simultanea di due o tre marcature in una sola immagine .
Un esempio di fluorescenza semplice:
DAPI viene eccitato nell'UV vicino con 365 nm ed emette nel campo spettrale del blu-violetto. La marcatura rende visibili i clei cellulari ed in particolare i cromosomi (Planapo 63x/1,40 olio).
Marcatura specifica per diagnosi medica :
Isotiocianato di fluorescina (FITC) collegato al fattore antinucleare HEP 2
(Plan-Neofluar 40x/1,30 olio).
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